細(xì)菌污染是生物實(shí)驗(yàn)室，在培養(yǎng)細(xì)胞的過(guò)程，常見的問(wèn)題之一，會(huì)直接引起細(xì)胞死亡，影響實(shí)驗(yàn)進(jìn)度。本期內(nèi)容，我們匯總了細(xì)菌污染的癥狀，并分別給出了應(yīng)對(duì)方法。

細(xì)菌是一種原核細(xì)胞微生物，一般為微米級(jí)別。細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中常見的污染菌為大腸桿菌、葡萄球菌、假單胞菌等。

細(xì)胞發(fā)生細(xì)菌污染后，有哪些癥狀？與其他污染相比，細(xì)菌污染在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中“發(fā)病"更為迅速，較容易被發(fā)現(xiàn)。具體表現(xiàn)為：
細(xì)胞培養(yǎng)液短期內(nèi)變黃且渾濁（大量酸性物質(zhì)累積）；
靜置的培養(yǎng)液時(shí)不渾濁，但稍加震蕩，就有許多渾濁物漂起；
可見培養(yǎng)液中有大量圓球狀顆粒物漂浮；
細(xì)胞停止生長(zhǎng)并有中毒表現(xiàn)，后出現(xiàn)大量死亡；

如何用實(shí)驗(yàn)來(lái)驗(yàn)證，細(xì)胞是否被細(xì)菌污染？常見的染色法、培養(yǎng)法以及PCR方法都可以對(duì)細(xì)菌污染進(jìn)行檢測(cè)。
如果只需要初步判定細(xì)胞是否被污染，課選擇涂片染色或培養(yǎng)法對(duì)樣品進(jìn)行檢測(cè)。
例如：革蘭氏染色法會(huì)使陽(yáng)性菌呈現(xiàn)紫色，陰性菌呈現(xiàn)紅色；向肉湯培養(yǎng)基內(nèi)滴入少量培養(yǎng)液，37 ℃培養(yǎng)，培養(yǎng)基變渾濁；專業(yè)的PCR檢測(cè)：以Minerva Biolabs公司的細(xì)菌PCR檢測(cè)試劑盒（Onar® Bacteria Detection Kit，貨號(hào)：12-1025）為例：
該試劑盒采用PCR方法，用于檢測(cè)生物樣品（包括細(xì)胞培養(yǎng)物和病毒貯存液）中是否存在細(xì)菌。根據(jù)序列分析，該試劑盒可檢測(cè)超過(guò)45種細(xì)菌屬，其中含污染細(xì)胞的常見菌屬：


如果細(xì)胞不幸遭遇到了細(xì)菌污染的侵襲，該如何應(yīng)對(duì)呢？對(duì)于常規(guī)細(xì)胞培養(yǎng)物而言，發(fā)生細(xì)菌污染，建議直接將培養(yǎng)物丟棄，并對(duì)環(huán)境進(jìn)行消殺，紫外線滅菌、消毒液擦拭培養(yǎng)箱、工作臺(tái)等。
對(duì)于重要且污染相對(duì)較輕的細(xì)胞：一般用抗生素的常用量的 5-10 倍作沖擊療法，用藥 24-48 小時(shí)后再換常規(guī)培養(yǎng)液，但需要需要注意的是：一旦發(fā)生污染后再使用抗生素常常難以清除干凈，有的抗生素只有抑菌作用而無(wú)殺菌效應(yīng)。且有研究表明，大量使用抗生素，或?qū)?xì)胞基因組產(chǎn)生影響，該種處理方法屬于“殺敵一千，自損八百"，因此不做推薦。

因此，防范大于治療，在細(xì)胞實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，我們不希望看到任何微生物污染的情況發(fā)生。為了避免浪費(fèi)有限的精力和經(jīng)費(fèi)，應(yīng)優(yōu)先預(yù)防污染的發(fā)生。實(shí)驗(yàn)前穿戴好防護(hù)用具，既是保護(hù)自己，也是保護(hù)實(shí)驗(yàn)材料；定期對(duì)實(shí)驗(yàn)環(huán)境進(jìn)行清潔消毒，也能有效預(yù)防微生物污染的發(fā)生。

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