現代生物技術一般認為包括基因工程技術、細胞工程技術、酶工程技術和發酵工程技術，而這些技術的發展幾乎都與細胞培養有密切關系，特別是在醫藥領域的發展，細胞培養更具有特殊的作用和價值。比如基因工程藥物或疫苗在研究生產過程中很多是通過細胞培養來實現的。基因工程乙肝疫苗很多是以CHO細胞作為載體；細胞工程中更是離不細胞培養，雜交瘤單克隆抗體，*是通過細胞培養來實現的，既使是現在飛速發展的基因工程抗體也離不開細胞培養。正在倍受重視的基因治療、體細胞治療也要經過細胞培養過程才能實現，發酵工程和酶工程有的也與細胞培養密切相關。總之，細胞培養在整個生物技術產業的發展中起到了很關鍵的核心作用。

那么在細胞培養時，首先肉眼觀察培養液是否變渾濁，如果變渾濁，基本可以確定是污染;如果肉眼觀察培養液沒有變渾濁：在顯微鏡下觀察黑點大小和形狀是否規則，是否運動，是做布朗運動還是呈直線型快速移動。如果黑點大小不規則，做布朗運動，黑點可能是細胞碎片(可能是細胞狀態不佳或者消化過度引起的)，也可能是血清反復凍融產生的蛋白沉淀引起的，也可能是細胞的代謝產物。如果黑點大小一致，快速移動，很可能是細菌污染。

如何預防細胞培養中黑點的產生?

掌握細胞傳代的最佳時機，不要細胞長老了再傳代;掌握好消化時間，防止消化過度產生細胞碎片;減少血清等試劑的凍融次數;將培養液的PH調到最佳;嚴格控制水質和器皿的清潔。

黑點已經產生了，如何進行處理?

如果判定黑點是污染，請及時將細胞處理后丟棄。其他情況，可參照以下進行：

如果是懸浮細胞：收集細胞上清慢速離心(500-600 rpm/min，5-6 min)并更換新的培養瓶;如果是貼壁細胞：將細胞用PBS洗2-3遍，洗的時候，輕輕拍打培養瓶，讓貼壁不牢的碎片和顆粒脫落，再棄去PBS，消化時先加低濃度的胰酶如0.05%胰酶消化1 min左右，讓細胞間隙中的顆粒和碎片脫落下來，去掉低濃度胰酶，然后正常消化細胞，將收集的細胞懸液慢速離心(500-600 rpm/min，5-6 min)并更換新的培養瓶，并可以嘗試適當增加血清濃度進行培養。

支原體污染不僅是細胞培養中需要克服的現象，而且是制藥、生物制品生產中需要加以避免的。支原體污染的影響是什么？

支原體常規PCR法其原理和熒光定量PCR是一樣的，根據支原體核糖體的特異保守序列設計引物，對待檢樣本DNA進行擴增，通過對擴增產物的大小分析作出判斷。

它的優點是準確度很高，特別是德國MB的試劑盒，不僅qPCR的靈敏度可以達到10CFU/ml以上，普通PCR的靈敏度也可以達到各國藥典的這個要求。

特異性強，*涵蓋所有可能感染細胞的支原體物種（涵蓋歐洲藥典規定的9種支原體），根據序列一致性，至少可以檢測到107種支原體物種。與細菌和真核DNA無交叉反應。

操作比qPCR多了個跑電泳的步驟。

時間短，2-3小時可以出結果。

唯yi的限制，因為檢測的是支原體的DNA，所以無法區分活的支原體。但生物制品在生產過程中，本身不應該產生支原體污染，污染過也不行，所以這個限制反而變成了優點。