在生物制藥領域，動物源原料存在安全風險，針對此風險，各大藥典制定了相關規(guī)范：

如《歐洲藥典》（EP8.0,2014)第5.2.8章強調(diào)了醫(yī)用產(chǎn)品的生產(chǎn)應優(yōu)先考慮使用“非TSE相關動物物種材料”或“無動物源材料”，使安全風險低化。

《美國藥典》也明確規(guī)定，為減少TSE傳播的潛在風險，建議使用無動物源生產(chǎn)原料代替動物源原料。

在疫苗生產(chǎn)領域，無動物源培養(yǎng)基的使用不僅可以使安全風險小化，而且存在諸多優(yōu)點。

疫苗生產(chǎn)用『無動物源』培養(yǎng)基的優(yōu)點

生產(chǎn)疫苗使用的動物源細胞培養(yǎng)基，具有潛在的安全風險，且存在批間差異，審批手續(xù)繁瑣等問題。

而無動物源培養(yǎng)基有著極大地*性：

1.無動物源培養(yǎng)基*避免了因原材料導致接種者感染外源病毒的風險

2.防止了動物源原料帶來的病毒干擾目標病毒

3.無血清的配方，使細胞懸浮培養(yǎng)更容易，減少細胞成團，利于疫苗廠大規(guī)模懸浮培養(yǎng)

4.無動物源配方，批間差異更小，利于工業(yè)化穩(wěn)定生產(chǎn)

5.原料無動物源成份，使疫苗審批的申報流程更簡便

6.無動物源培養(yǎng)基，在海關進口時，手續(xù)更簡便，保證原料更快捷地能及時供應

無動物源培養(yǎng)基已被疫苗生產(chǎn)廠家大量使用，其中一款Himedia公司研制的新型的CELLin1™培養(yǎng)基，更是因其應用面廣，細胞培養(yǎng)效果佳，病毒產(chǎn)量大，而表現(xiàn)上佳。

CELLin1™培養(yǎng)基適用的疫苗品種范圍

CELLin1™適用于以下疫苗生產(chǎn)常用的5種細胞

CELLin1™作為一種

新型『無動物源』培養(yǎng)基，

專門用于培養(yǎng)上述五種細胞，

且具有非常好的培養(yǎng)效果。

CELLin1™『病毒生產(chǎn)能力』和『促細胞生長能力』

驗證報告

1.實驗信息

本實驗使用CELLin1™無動物源培養(yǎng)基與競品OptiPRO™SFM (Gibco)無動物源培養(yǎng)基分別培養(yǎng)細胞。

實驗選用的細胞系：

MDBK細胞，牛皰疹病毒1型(BHV-1)

MDCK細胞，流感病毒A

PK-15細胞，豬圓環(huán)病毒2型（PCV）

Vero細胞，狂犬病毒

B.實驗觀測指標

1.病毒產(chǎn)生能力（96孔板內(nèi)進行）

1.1生長曲線：檢測培養(yǎng)基維持細胞生長和達到高細胞密度和高活力的能力

1.2病毒滴度：檢測培養(yǎng)基支持病毒在宿主細胞內(nèi)繁殖的能力

2.種子制備和細胞存儲

宿主細胞系的存儲和種子制備是病毒疫苗生產(chǎn)前的2個主要步驟。通過連續(xù)傳代，檢測CELLin1™支持宿主細胞生長的能力。

C.實驗結果

MDBK細胞

采用CELLin1™培養(yǎng)MDBK細胞，

BHV1病毒滴度用TCID50 (108）表示（下圖）。

數(shù)據(jù)表明，CELLin1™培養(yǎng)的細胞少反而得到了更大的病毒產(chǎn)量，CELLin1™培養(yǎng)的MDBK細胞更健康、更有活力，產(chǎn)毒能力更強。

MDBK細胞在T175培養(yǎng)瓶中，

用CELLin1™或競品培養(yǎng)基培養(yǎng)和連續(xù)傳代。

當細胞長至70-80%時進行傳代（下圖）。

CELLin1™連續(xù)五代培養(yǎng)的MDBK細胞數(shù)量遠高于競品，而且細胞生長更穩(wěn)定。

MDCK細胞

采用CELLin1™培養(yǎng)MDCK細胞，

流感病毒A滴度用TCID50 (108）表示（下圖）。

數(shù)據(jù)表明，CELLin1™培養(yǎng)的MDCK細胞產(chǎn)毒能力更強。

連續(xù)五代培養(yǎng)，CELLin1™培養(yǎng)的MDCK細胞數(shù)量遠高于競品，對細胞的支持非常穩(wěn)定。

PK-15細胞

采用CELLin1™培養(yǎng)PK-15細胞，

豬圓環(huán)病毒滴度用TCID50 (108）表示（下圖）。

數(shù)據(jù)表明，CELLin1培養(yǎng)基更適合PK-15細胞生長。

PK-15細胞在T175培養(yǎng)瓶中，

用CELLin1™或競品培養(yǎng)基培養(yǎng)和連續(xù)傳代。

當細胞長至70-80%時進行傳代（下圖）。

連續(xù)五代培養(yǎng)，CELLin1™培養(yǎng)的PK-15細胞數(shù)量均高于競品，對細胞的支持非常穩(wěn)定。

Vero細胞

采用CELLin1™培養(yǎng)Vero細胞，

狂犬病毒滴度用TCID50（108） 表示（下圖）。

數(shù)據(jù)表明，CELLin1™培養(yǎng)的細胞少反而得到了更大的病毒產(chǎn)量。CELLin1™培養(yǎng)的Vero細胞更健康、更有活力，產(chǎn)毒能力更強。

Vero細胞在T175培養(yǎng)瓶中，

用CELLin1™或競品培養(yǎng)基培養(yǎng)和連續(xù)傳代。

當細胞長至70-80%時進行傳代（下圖）。

通過連續(xù)五代培養(yǎng)，與競品的細胞密度對比，CELLin1™對Vero細胞的支持非常穩(wěn)定。

D. 結論

CELLin1™支持Vero、PK-15、MDCK、MDBK細胞生長和病毒繁殖的能力已得到了驗證。

在這些細胞系中，CELLin1™顯示出的病毒生產(chǎn)能力和促細胞生長能力。

因而，CELLin1™可有效的作為通用培養(yǎng)基用于Vero、PK-15、MDCK、MDBK細胞的病毒生產(chǎn)。

CELLin1™的配制方法

CELLin1™是一款化學限定的

疫苗生產(chǎn)用『無動物源』培養(yǎng)基，

分為A、B兩個部分。

A部分為基礎培養(yǎng)基，

呈白色至淺粉色均勻粉末，2-8 ℃避光保存。

B部分為生長添加劑，

呈無色透明溶液，-20 ℃保存.

1L規(guī)格的CELLin1™配制步驟

取11.5g A部分用900ml組織培養(yǎng)級別水重懸，持續(xù)攪拌直至粉末*溶解。不要加熱。

加入2.70g碳酸氫鈉粉末或36.0ml 7.5％碳酸氫鈉溶液配制1升培養(yǎng)基。攪拌至溶解。

加入584mg的L-谷氨酰胺粉末或加入20mL濃度為200mM的L-谷氨酰胺以制備1升培養(yǎng)基。攪拌至溶解。

用1mol/L的HCl或1mol/L的NaOH將pH調(diào)節(jié)至低于理想pH值0.2-0.3單位水平，因為pH值在過濾后趨于上升。

用組織培養(yǎng)級別水將體積補足至1000ml。

立即用孔徑≤0.22μM濾器過濾培養(yǎng)基以滅菌。使用正壓而非真空抽濾，以減少CO2的丟失。

在2-8℃解凍生長添加劑（B部分）。

在A部分和B部分放入生物安全柜之前，對兩部分瓶子表面噴灑異丙醇進行消毒。

在無菌條件下將B部分全部內(nèi)容物轉移至1L基礎培養(yǎng)基（A部分）中，輕輕混合。

配置*的培養(yǎng)基可直接使用。儲存時，*培養(yǎng)基在2-8℃下的保質期為8周。

     注：在使用過程中，還需要細胞的無血清馴化。

CELLin1™產(chǎn)品信息

品名：CELLin1™化學限定疫苗生產(chǎn)用無動物源成分培養(yǎng)基

英文名：CELLin1™ Chemically defined, Animal Component Free Virus Production medium

貨號：SFM036AP

生產(chǎn)商：HiMedia Laboratories

生產(chǎn)地：印度

組成：

A部分為基礎培養(yǎng)基，干粉，2-8℃保存

B部分為生長添加劑，液體，-20 ℃保存

內(nèi)毒素含量：小于1EU/ml

市場價：

1L/套    ￥950

10L/套   ￥8000

廠家介紹:

HiMedia   Laboratories公司是世界的培養(yǎng)基生產(chǎn)廠家。HiMedia公司總部位于印度，50年致力于微生物培養(yǎng)基和細胞培養(yǎng)基的研發(fā)生產(chǎn)，在制藥等工業(yè)生產(chǎn)中被廣泛應用，其產(chǎn)品行銷140多個國家。尤其是HiMedia公司的非動物源培養(yǎng)基，在上占地位。

HiMedia公司生產(chǎn)的培養(yǎng)基都具備

WHO GMP、ISO9001、

ISO13485質量管理體系認證

和CE、FDA注冊登記，

能更好地應用于工業(yè)化生產(chǎn)。

2019年，HiMedia公司的CELLin1™產(chǎn)品正式進入中國，由北京締一生物作為總代理。北京締一生物被中國生物界譽為值得“持續(xù)信賴的供貨商”，在細胞培養(yǎng)的工業(yè)化生產(chǎn)領域有著專業(yè)的技術背景，為國內(nèi)疫苗生產(chǎn)（如流感疫苗，禽流感疫苗，豬藍耳疫苗等）提供了有力的幫助和支持。

現(xiàn)今我們引入CELLin1™給科研人員和工業(yè)藥廠，希望能幫助藥廠進一步發(fā)展，使我國疫苗生產(chǎn)領域能邁上一個全新的高度！